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pcr由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
发布时间:2023-04-26 09:18:37

PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性一退火—延伸三个基本反应步骤构成。这个反应过程在PCR反应容器中进行,随着基因扩增仪的不断发展,其反应容器也经历了从1.5ml到0.2ml (0.25m1)的离心管逐步发展成PCR专用的薄壁的0.2ml,0.1mlpcr管。随着pcr扩增反应数量的提高,逐步形成了PCR条、PCR板高通量的基因扩增容器。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

模板DNA的变性:

模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,以便它与引物结合,为下轮反应做准备。

模板DNA与引物的退火(复性):

模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右后,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

引物的延伸:

DNA模板——引物结合物在Taq的作用下,以dNTP为反应原料,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。

PCR技术的基本原理

该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。

DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。

在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端,并以此为起始点,沿模板5´→3´方向延伸,合成一条新的DNA互补链。


(文章来源于互联网)

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