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pcr技术的基本原理
发布时间:2023-02-20 09:03:43

PCR技术类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性一退火—延伸三个基本反应步骤构成。这个反应过程在PCR反应容器中进行,随着基因扩增仪的不断发展,其反应容器也经历了从1.5ml到0.2ml (0.25m1)的离心管逐步发展成PCR专用的薄壁的0.2ml,0.1mlpcr管。随着pcr扩增反应数量的提高,逐步形成了PCR条、PCR板高通量的基因扩增容器。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成

模板DNA的变性:

模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,以便它与引物结合,为下轮反应做准备。


模板DNA与引物的退火(复性):

模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右后,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。


引物的延伸:

DNA模板——引物结合物在Taq的作用下,以dNTP为反应原料,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。

PCR技术的基本原理

该技术是在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下,依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。


DNA聚合酶以单链DNA为模板,借助一小段双链DNA来启动合成,通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合,形成部分双链。


在适宜的温度和环境下,DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3´-OH末端,并以此为起始点,沿模板5´→3´方向延伸,合成一条新的DNA互补链。

如何选择PCR管

1、材质:PCR 耗材一般都是 PP 材质,因为 PCR/qPCR 耗材通常会与试剂或样品直接接触,表面不易于粘附生物分子,有良好的化学耐性及温度耐受性。


2、PCR 管/板体积:依据具体的实验要求选用合适的产品。单管和联管是两种最常用的形式。


3、管盖选择:单管和连管都有平盖和凸盖之分,而平盖和凸盖各有优点。平盖适用于荧光定量PCR。


4、管壁厚度:管壁厚度会直接影响热传导率,极薄的壁厚可优化热传递减少循环时间。进一步减少了热障,从而带来更快,更稳健的反应。


5、颜色:PCR板通常可提供多种不同的颜色形式,透明的 PCR 管更有助于进行样品分类管理。白色 PCR 产品可最大程度地反射荧光信号,减少孔间信号交叉污染,可优化实时荧光定量 PCR 的结果。不同品牌仪器,由于荧光检测器位置设计不同,请参考生产厂家推荐的耗材。

(文章来源于互联网)

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