1. Sanger测序(链终止测序)
工作原理:
DNA复制:首先,将待测序的DNA片段通过PCR(聚合酶链反应)扩增。
终止子添加:在DNA复制过程中,使用带有不同终止子的核苷酸(ddNTPs)。
链终止:当ddNTPs加入时,DNA链的合成终止,因为它们没有3羟基,不能与下一个核苷酸连接。
电泳分离:将所有新合成的DNA链进行电泳分离。
读取序列:通过检测每个DNA链的终止点,可以确定每个核苷酸的序列。
2. 测序通量测序(二代测序)
工作原理:
片段化:将DNA片段化成小片段。
文库构建:将片段化的DNA连接到适配体上,形成文库。
并行测序:使用荧光标记的核苷酸进行PCR扩增,并在每个循环中读取序列。
序列读取:通过检测荧光信号的变化来确定每个核苷酸。
常见的二代测序技术包括:
Illumina测序:基于测序通量,使用测序芯片,通过荧光信号读取序列。
ABI SOLiD测序:使用合成测序,通过检测化学信号读取序列。
Ion Torrent测序:使用半导体传感器,通过检测离子流读取序列。
3. 单分子测序(三代测序)
工作原理:
单分子检测:直接在单个DNA分子上进行测序,而不是像二代测序那样先进行片段化。
实时监测:在DNA复制或合成过程中实时监测,可以同时读取多个碱基。
信号检测:通过检测荧光信号或离子流等来读取序列。
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