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基因测序仪工作原理
发布时间:2024-09-04 10:01:29

1. Sanger测序(链终止测序)

工作原理:

DNA复制:首先,将待测序的DNA片段通过PCR(聚合酶链反应)扩增。

终止子添加:在DNA复制过程中,使用带有不同终止子的核苷酸(ddNTPs)。

链终止:当ddNTPs加入时,DNA链的合成终止,因为它们没有3羟基,不能与下一个核苷酸连接。

电泳分离:将所有新合成的DNA链进行电泳分离。

读取序列:通过检测每个DNA链的终止点,可以确定每个核苷酸的序列。

2. 测序通量测序(二代测序)

工作原理:

片段化:将DNA片段化成小片段。

文库构建:将片段化的DNA连接到适配体上,形成文库。

并行测序:使用荧光标记的核苷酸进行PCR扩增,并在每个循环中读取序列。

序列读取:通过检测荧光信号的变化来确定每个核苷酸。

常见的二代测序技术包括:

Illumina测序:基于测序通量,使用测序芯片,通过荧光信号读取序列。

ABI SOLiD测序:使用合成测序,通过检测化学信号读取序列。

Ion Torrent测序:使用半导体传感器,通过检测离子流读取序列。

3. 单分子测序(三代测序)

工作原理:

单分子检测:直接在单个DNA分子上进行测序,而不是像二代测序那样先进行片段化。

实时监测:在DNA复制或合成过程中实时监测,可以同时读取多个碱基。

信号检测:通过检测荧光信号或离子流等来读取序列。

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