PCR反应:
首先,在PCR反应管或板中组装PCR反应混合物,包括待检测的DNA或RNA模板、引物、荧光标记的探针或染料、聚合酶等。
PCR反应过程包括变性、退火和延伸步骤,通过循环加热和降温来扩增目标DNA或RNA序列。
荧光信号检测:
在PCR反应过程中,荧光标记的探针或染料与目标序列结合,产生荧光信号。
实时荧光定量PCR分析仪通过光学系统检测PCR反应管或板中的荧光信号,荧光信号的强度与PCR产物的数量成正比。
数据采集和分析:
控制系统通过控制温度循环和光学系统,实时监测PCR反应过程中的荧光信号。
数据分析软件会记录并分析荧光信号的变化,绘制荧光信号曲线,根据标准曲线计算出样本中目标序列的起始数量。
定量分析:
通过比较待检测样本的荧光信号与标准曲线上的对应值,可以确定待检测样本中目标序列的起始数量。
实时荧光定量PCR分析仪可以提供定量结果,通常以基因拷贝数或相对表达量的形式呈现。
结果输出:
分析软件可以将定量结果输出到计算机或打印机,以便后续数据分析和报告生成。
结果通常包括目标序列的数量、PCR曲线、荧光信号曲线等信息。
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