准备实验室环境：确保实验室环境干净整洁，避免污染。准备好所需的试剂、样本和实验仪器。

准备ＰＣＲ反应体系：按照实验方案准备ＰＣＲ反应混合液，包括引物、探针、ＤＮＡ模板、酶和缓冲液等成分。确保反应体系的配比准确无误。

设置ＰＣＲ程序：根据实验方案设置ＰＣＲ程序，包括变性、退火和延伸等步骤的温度和时间参数。确保程序设置正确，以保证ＰＣＲ反应的准确性和稳定性。

加载样品：将准备好的ＰＣＲ反应混合液加载到ＰＣＲ板中，同时加入负对照和阳性对照样品。确保每个样品都有正确标记，并避免交叉污染。

放置ＰＣＲ板：将装有ＰＣＲ反应混合液的ＰＣＲ板放入实时荧光定量ＰＣＲ分析仪中，确保板的位置正确，避免操作错误。

运行ＰＣＲ程序：启动ＰＣＲ程序，让实时荧光定量ＰＣＲ分析仪按照设定的程序进行ＰＣＲ反应。实时监测ＰＣＲ反应过程中的荧光信号，记录数据。

数据分析：分析ＰＣＲ反应的实时荧光数据，生成标准曲线并计算样品中目标ＤＮＡ的相对含量。根据实验目的进行数据解读和结果分析。

清洁和维护：实验结束后，及时清洁ＰＣＲ板和仪器，避免污染。定期对实时荧光定量ＰＣＲ分析仪进行维护和校准，确保其正常运行。

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